Как работают наборы ИФА

Метод сэндвича с двойными антителами 1. Упаковка: с 0,05MPH9. карбонатный пакет забуферен для разбавления антитела до содержания белка от 1 до 10 мкг/мл. Добавьте 0,1 мл при 4 градусах C на ночь в реакционные отверстия каждой полистироловой пластины. На следующий день вылейте раствор в лунку и промойте его 3 раза промывочным буфером по 3 минуты каждый раз.

(для краткости промывание, то же самое ниже). 2. Добавление образца: Добавьте определенное разведение тестируемого образца (0,1 мл) в указанное выше -отверстие для реакции на упаковке, инкубируйте в течение 1 часа при 37 градусах C. Затем промойте.

(Одновременно проделайте пустое отверстие, отверстие для отрицательного контроля и отверстие для положительного контроля). 3. Добавьте антитела,-меченные ферментом: В каждую реакционную лунку добавьте свежеразведенное антитело,-меченое ферментом (разведение после титрования), 0,1 мл.

Инкубируйте от 0,5 до 1 часа при 37 градусах Цельсия и промойте.

4. Добавьте цветной дисплей с жидким субстратом: добавьте временный препарат раствора субстрата ТМВ 0,1 мл, 37 градусов C, от 10 до 30 минут в каждое реакционное отверстие.

5. Завершение реакции: добавьте 0,05 мл серной кислоты 2М в каждое реакционное отверстие.. 6. Результаты определяют: можно на белом фоне, непосредственно невооруженным глазом, чтобы наблюдать за результатами: чем темнее цвет внутри реакционного отверстия, тем сильнее положительная степень, отрицательная реакция бесцветна или очень поверхностна, в зависимости от цвета отражается в глубине, к цвету

Сканирование значения OD: на тестере ELISA при длине волны 450 нм (если цветопередача BTS, то 410 нм), до нулевого контрольного отверстия, проглоченного для измерения значения OD каждого отверстия, если оно превышает указанное значение OD отрицательного контроля в 2,1 раза, то есть положительное.

Косвенный закон

1. Используйте упаковку для буферизации, чтобы разбавить известный антиген до концентрации от 1 до 10 мг/мл на лунку плюс 0,1 мл при 4 градусах Цельсия в течение ночи;

2. На следующий день умыться 3 раза;

3. Добавить определенное разведение образца (неизвестное антитело) 0,1 мл в указанное выше реакционное отверстие на упаковке, инкубировать в течение 1 часа при 37 градусах С, промыть;

4. (как пустой, так и отрицательный и положительный контрольные отверстия) в реакционное отверстие добавьте свежеразведенную ферментную метку второго антитела (антитело к -) 0,1 мл;

5,37 градуса С, инкубация 35-60 минут, промывка;

6. 'Последний раз моешься DDW. Остальные шаги такие же, как и в «методе сэндвича с двойными антителами» (4, 5, 6).